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本试剂盒用于标记活细胞线粒体，在Ex/Em = 490/520nm使之带上绿色荧光。试剂盒使用的是一种专属染料，选择性地在不同膜电位的线粒体中积累。这种线粒体指示剂是一种疏水性复合物，能轻易渗透到活细胞中，且进入细胞后绑定在线粒体上。因为该指示剂带有能定位于细胞的基团，因此可以在线粒体上存留很长时间。

• 准备染色工作液：取20μL Mitolite Green（组分A）加入到10mL Live Cell Staining Buffer (组分B)中，混匀，备用；
  
  • 20μL 500X Mitolite Green (组分A)足够用于一个96孔板，分装未使用的500X Mitolite Green，并在-20℃以下，避光保存；
    
  • 具体的Mitolite Green最佳使用浓度，根据细胞的类型，组织类型，实验目的等因素的决定。
• 对于贴壁细胞：将细胞接种在96孔板中或盖玻片上。当细胞生长到适合的浓度，加入等体积工作染液，37℃，5% CO₂培养箱避光孵育30分钟到2小时。弃染色液，用HHBS(Hanks和20mM Hepes缓冲液)或自己所选择的缓冲液（例如：加入培养基按1:1稀释）洗涤。通过带有FITC滤光器的荧光显微镜观察细胞。
  
  • 如果细胞未充分染色，可提高染色液浓度或是延长孵育时间。
• 对于悬浮细胞：1000rpm离心5分钟，得到细胞沉淀并抽出上清液。用预热37℃保温的培养基重悬细胞，并加入等体积染色工作液37℃，5% CO₂培养箱避光孵育30分钟到2小时。弃染色液，用HHBS(Hanks和20mM Hepes缓冲液)或自己所选择的缓冲液（例如：加入培养基按1:1稀释）洗涤。通过带有FITC滤光器的荧光显微镜观察细胞。
  
  • 如果细胞未充分染色，可提高染色液浓度或是延长孵育时间。
    
  • 悬浮细胞也可以接种在用BD Cell-Tak (BD Biosciences)处理过的盖玻片上，像贴壁细胞一样进行染色(见步骤2)。